細(xì)胞名稱：人甲狀腺癌細(xì)胞8305C（未分化）

細(xì)胞代號(hào)：8305C

細(xì)胞培養(yǎng)條件：MEM+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%NEAA+1%P/S  

細(xì)胞生長形態(tài)：貼壁生長

近年來，惡性腫瘤（癌癥）已經(jīng)成為嚴(yán)重威脅中國人群健康的主要公共衛(wèi)生問題之一。為什么癌癥容易復(fù)發(fā)，很難治愈呢？因?yàn)榻^大部分抗腫瘤藥物，最終都逃不過腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性的命運(yùn)，導(dǎo)致癌癥繼續(xù)發(fā)展。

   對(duì)于腫瘤細(xì)胞耐藥的產(chǎn)生原因仍然處在研究之中，如何改善腫瘤細(xì)胞對(duì)療藥物耐藥依然是目前研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。

什么是耐藥性？

   療是治療惡性腫瘤的方法中有效的手段之一，指用化學(xué)藥物的方法殺死腫瘤細(xì)胞。常用的藥物包括細(xì)胞增殖的抑制劑、DNA損傷修復(fù)途徑的抑制劑，如阿霉素（adriamycin）、紫杉醇（paclitaxel）、順鉑（cisplatin）、替莫唑胺（temozolomide，TMZ）等。

   然而在療過程中腫瘤細(xì)胞常常產(chǎn)生耐藥性，是腫瘤療最嚴(yán)重的障礙之一。

  耐藥性一般是指病原體與藥物多次接觸后，對(duì)藥物的敏感性下降甚至消失，致使藥物對(duì)該病原體的療效降低或無效。

癌細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性是癌癥治療失敗的主要原因之一，這可能導(dǎo)致癌癥加快進(jìn)展、復(fù)發(fā)甚至患者死亡。這也成為了癌癥患者和家屬、醫(yī)護(hù)人員和癌癥研究者面臨的具挑戰(zhàn)性的問題之一。

如何構(gòu)建體外耐藥細(xì)胞？

   腫瘤細(xì)胞耐藥的產(chǎn)生是一個(gè)復(fù)雜的過程，它的機(jī)制廣泛牽涉到藥物代謝學(xué)、病理學(xué)、生理學(xué)等多個(gè)學(xué)科，這就決定了腫瘤細(xì)胞對(duì)療藥物產(chǎn)生耐藥的機(jī)制是復(fù)雜的，因此體外建立療藥物耐藥細(xì)胞株仍然是研究腫瘤細(xì)胞耐藥機(jī)制的重要方法。

   體外構(gòu)建耐藥株細(xì)胞的基本原理是，細(xì)胞與低劑量的藥物長期接觸，引起細(xì)胞本身藥物化學(xué)過程的改變，細(xì)胞膜上出現(xiàn)Pgp糖蛋白，使細(xì)胞逐漸對(duì)藥物耐受，隨著藥物濃度的遞增，其耐受程度逐漸加強(qiáng)。

   目前已知的體外建立耐藥細(xì)胞株主要有以下幾種方式：大劑量藥物沖擊法、藥物濃度遞增法、藥物濃度遞增與大劑量藥物沖擊相結(jié)合法、轉(zhuǎn)基因結(jié)合藥物篩選法等。藥物濃度遞增法和大劑量藥物沖擊法成為臨床建立腫瘤細(xì)胞療耐藥模型的常用方法。

1、大劑量藥物沖擊法

   將處于對(duì)數(shù)生長期的腫瘤細(xì)胞（匯合度60%~80%）置于含有濃度的藥物濃度的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，棄去培養(yǎng)液，PBS清洗兩遍，更換不含藥物培養(yǎng)基，常規(guī)培養(yǎng)，待細(xì)胞恢復(fù)生長，培養(yǎng)一段時(shí)間后重復(fù)上述操作，將篩選出的細(xì)胞在一定濃度的藥物濃度培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)依這樣不斷改變作用時(shí)間，共經(jīng)過1h、2h、4h、6h、12h、24h、36h、48h、60h、72h共10個(gè)作用時(shí)間段，約6-8個(gè)月的培養(yǎng)，最終使得細(xì)胞能夠在一定濃度的藥物的培養(yǎng)液中持續(xù)穩(wěn)定生長并傳代，然后脫藥培養(yǎng)1個(gè)月在檢測(cè)細(xì)胞的生物特性及耐藥指標(biāo)。

   其優(yōu)點(diǎn)是與臨床上大劑量化藥物沖擊的治療方式相接近，但是缺點(diǎn)在于大劑量藥物沖擊法的藥物濃度很高，細(xì)胞培養(yǎng)由于外環(huán)境驟變，細(xì)胞可能難以耐受，細(xì)胞狀態(tài)較難控制，且耐藥性能不穩(wěn)定。

2、藥物濃度遞增法

   取處于對(duì)數(shù)生長期的腫瘤細(xì)胞（匯合度60%~80%），加入起始濃度為低濃度（建議為親本細(xì)胞株的IC50的1/10-1/5）的藥物作用24h，棄去培養(yǎng)液，PBS清洗2遍，更換不含藥物培養(yǎng)基，細(xì)胞恢復(fù)生長后，消化傳代復(fù)以低濃度作用細(xì)胞24h，待細(xì)胞增殖至正常形態(tài)后，重復(fù)上述藥物沖擊，每種濃度沖擊6-8次。待細(xì)胞在此濃度穩(wěn)定生長后，提高藥物濃度繼續(xù)培養(yǎng)，藥物依次遞增濃度加藥。藥物誘導(dǎo)歷時(shí)6-8個(gè)月，直到細(xì)胞能夠在濃度的藥物中穩(wěn)定生長。

   優(yōu)點(diǎn)在于誘導(dǎo)耐藥細(xì)胞的藥物劑量循序漸進(jìn)，細(xì)胞培養(yǎng)的外環(huán)境逐漸改變，細(xì)胞較易耐受，狀態(tài)較好，缺點(diǎn)在于誘導(dǎo)耐藥過程耗時(shí)很長，且其療藥物的作用方式與臨床上療藥物大劑量短療程的療原則存在一定的差異。

   無論使用哪種方法，都需要檢測(cè)親本細(xì)胞和耐藥細(xì)胞的IC50，通過IC50評(píng)估細(xì)胞的耐藥性。

   IC50(half maximal inhibitory concentration)，即半抑制濃度，指某一種物質(zhì)對(duì)某些生物程序抑制達(dá)到50%抑制效果時(shí)的濃度。通常用IC50來衡量藥物對(duì)細(xì)胞的毒性或者細(xì)胞對(duì)藥物的耐受能力,在藥物實(shí)驗(yàn)中,常用IC50來評(píng)估實(shí)驗(yàn)中使用的藥物濃度。

   根據(jù)測(cè)定的親本細(xì)胞和耐藥細(xì)胞的IC50值，可以計(jì)算出耐藥指數(shù)（resistanceindex, RI），RI=耐藥細(xì)胞系的IC50/親代細(xì)胞系的IC50，若RI>5則認(rèn)為耐藥細(xì)胞系的耐藥性符合耐藥株的要求。

人甲狀腺癌細(xì)胞8305C（未分化）千舍生物熱賣耐藥細(xì)胞株：

人轉(zhuǎn)移胰腺腺癌細(xì)胞吉西他濱耐藥株AsPC-1/GEM DMEM+15%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%P/S 貼壁生長

人結(jié)直腸癌氟尿嘧啶耐藥株HCT15/Fu 1640+10%FBS+1%P/S +20ug/ml 5-FU 貼壁生長

人結(jié)直腸癌紫杉醇耐藥株HCT-15/Taxol 1640+10%FBS+1%P/S+500ng/ml紫杉醇 貼壁生長

人結(jié)直腸癌細(xì)胞氟尿嘧啶耐藥株LOVO/5FU F12K+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

人乳腺癌阿霉素耐藥細(xì)胞 MCF-7/Adr 1640+10%FBS+1%PS+500ng/mL ADR 貼壁生長

人結(jié)直腸癌細(xì)胞氟尿嘧啶耐藥株 SW620/5FU L15+10%FBS +1%P/S   貼壁生長

人甲狀腺癌細(xì)胞8305C（未分化） 8305C MEM+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%NEAA+1%P/S  

人甲狀腺癌細(xì)胞 BCPaP 1640+10%FBS+1%P/S

人甲狀腺癌細(xì)胞 FTC-133 1640+10%FBS +1%P/S

人甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞 IHH4 1640+10%FBS +1%P/S

人甲狀腺癌細(xì)胞 KTC-1 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺 +1%丙酮酸鈉+NEAA+1%P/S

人甲狀腺正常細(xì)胞 Nthy-ori 3-1 1640+10%FBS+1%P/S  

人甲狀腺癌細(xì)胞 SW579 L15+10%FBS+1%P/S      

人乳頭狀甲狀腺癌細(xì)胞株 TPC-1 1640+10%FBS+1%P/S

人甲狀腺癌細(xì)胞 TT F-12K+10%FBS+1%P/S