在進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，我們經(jīng)常會(huì)聽(tīng)到一些專(zhuān)業(yè)名詞，原代培養(yǎng)是什么？什么是世代數(shù)？細(xì)胞系是什么？有限細(xì)胞系又代表的是什么？有的專(zhuān)有名詞搞不清楚的話(huà)，會(huì)對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程也會(huì)有一定的影響。根據(jù)老師們的反饋，我們總結(jié)了以下容易混淆的概念供大家參考~

1原代培養(yǎng)（Primary culture）

開(kāi)始于直接取自生物體的細(xì)胞、組織或器官的培養(yǎng)稱(chēng)為原代培養(yǎng)。通常代表異質(zhì)細(xì)胞群，很難標(biāo)準(zhǔn)化和繁殖。它們的壽命一般有限，而且已知它們會(huì)隨著時(shí)間而改變其差異特征。

2傳代（Passage(Subculture)）

細(xì)胞從一個(gè)皿里轉(zhuǎn)移或傳代到另一皿里的過(guò)程稱(chēng)為細(xì)胞傳代。這是一個(gè)操作行為，無(wú)法準(zhǔn)確定義細(xì)胞分裂次數(shù)。

3傳代次數(shù)（Passage number）

一種細(xì)胞被傳代培養(yǎng)的次數(shù)稱(chēng)為傳代次數(shù)。

4世代數(shù)（Generation number）

一種細(xì)胞所經(jīng)歷的細(xì)胞數(shù)量倍增次數(shù)稱(chēng)為世代數(shù)。

5群體倍增時(shí)間（Population doubling time）

在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期中期細(xì)胞數(shù)量翻倍所需要的時(shí)間間隔稱(chēng)為群體倍增時(shí)間。

6群體倍增次數(shù)（Population doubling）

在培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞所經(jīng)歷的細(xì)胞數(shù)量倍增次數(shù)稱(chēng)為群體倍增次數(shù)。

7細(xì)胞系（Cell line）

原代細(xì)胞經(jīng)過(guò)第一次傳代后增殖的細(xì)胞稱(chēng)為細(xì)胞系或亞克隆。隨著細(xì)胞的傳代，生長(zhǎng)能力*強(qiáng)的細(xì)胞會(huì)占據(jù)優(yōu)勢(shì)，最終導(dǎo)致細(xì)胞群體在基因型和表現(xiàn)型上達(dá)到一定程度的均一性。

8細(xì)胞株（Cell strain）

細(xì)胞系通過(guò)選擇或克隆獲得的具有特征的細(xì)胞系稱(chēng)為細(xì)胞株。與親代細(xì)胞系起始時(shí)相比，細(xì)胞株往往會(huì)獲得其他一些遺傳學(xué)改變。

9有限細(xì)胞系（Finite cell line）

通過(guò)傳代增殖但在體外只能增殖有限細(xì)胞數(shù)量的一種細(xì)胞稱(chēng)為有限細(xì)胞系（通常60-70倍增次數(shù)）。

10衰老（Senescence）

與染色體端粒縮短相聯(lián)系的生物調(diào)控的增殖潛力損失稱(chēng)為細(xì)胞衰老。存活的細(xì)胞也可能保留一些功能活性。

11永生化（Immortalization）

獲得無(wú)限的壽命，可能是細(xì)胞自發(fā)產(chǎn)生的，也可能是以轉(zhuǎn)染引起的。

12無(wú)限細(xì)胞系（Infinite/immortal/strain）

具有無(wú)限增殖能力的細(xì)胞系或細(xì)胞株稱(chēng)為無(wú)限細(xì)胞系/連續(xù)細(xì)胞系。

13平板效率（Plating efficiency）

在傳代培養(yǎng)中產(chǎn)生集落的細(xì)胞的百分比稱(chēng)為平板效率。如果每個(gè)集落都可以說(shuō)是來(lái)自一個(gè)細(xì)胞，那么平板效率等同于克隆效率/集落形成效率。有時(shí)，平板效率被粗略地用來(lái)描述傳代培養(yǎng)后存活的細(xì)胞數(shù)量，但這被更好地稱(chēng)為種子效率。

導(dǎo)致細(xì)胞污染的原因主要有以下幾方面：

環(huán)境：水浴鍋、培養(yǎng)箱水盤(pán)、細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)壁、超凈臺(tái)、桌面及試劑瓶身、細(xì)胞房空氣消毒。

操作：細(xì)胞復(fù)蘇、傳代、凍存等過(guò)程中也可帶入污染。

試劑：血清、基礎(chǔ)培養(yǎng)基、胰酶、輔助試劑、營(yíng)養(yǎng)添加物等。

耗材：培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶、槍頭。

細(xì)胞本身：本身攜帶污染、細(xì)胞老化、分化等。

如何進(jìn)行污染源排查？

*血清：其他試劑保持不變，僅更換血清。

*基礎(chǔ)培養(yǎng)基：其他試劑保持不變，僅更換基礎(chǔ)培養(yǎng)基。

*PBS：其他試劑保持不變，僅更換PBS。

*胰酶：若細(xì)胞復(fù)蘇的很好，一傳代就污染，可以嘗試其他試劑保持不變，更換消化用胰酶，看細(xì)胞狀態(tài)。

細(xì)胞反復(fù)復(fù)蘇都會(huì)出現(xiàn)污染，那可保持培養(yǎng)體系不變，培養(yǎng)其他類(lèi)型且適用于此培養(yǎng)體系的細(xì)胞，觀察是否有污染出現(xiàn)。整個(gè)營(yíng)養(yǎng)體系：基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清、營(yíng)養(yǎng)添加物都可使用控制變量法進(jìn)行排查。

*耗材

培養(yǎng)基及輔助試劑等條件不變，使用新耗材（培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶、槍頭）培養(yǎng)細(xì)胞，觀察細(xì)胞是否有污染。

*細(xì)胞本身

細(xì)胞本身攜帶污染源。可對(duì)細(xì)胞進(jìn)行無(wú)菌檢測(cè)（細(xì)菌、真菌、支原體）。

細(xì)胞分化，細(xì)胞一旦分化，很難逆轉(zhuǎn)，無(wú)法通過(guò)外界營(yíng)養(yǎng)體系和生長(zhǎng)條件的調(diào)整“*”。

*細(xì)胞老化：細(xì)胞一旦老化，是無(wú)法逆轉(zhuǎn)的。

因此，大家需要學(xué)會(huì)觀察細(xì)胞的形態(tài)并進(jìn)行分析，可以按照這幾點(diǎn)進(jìn)行控制變量排查，如若確認(rèn)是細(xì)胞本身問(wèn)題，若細(xì)胞本身不是很昂貴，建議丟掉重新培養(yǎng)，若較珍貴，污染后可嘗試根據(jù)污染種類(lèi)選擇合適的抗生素進(jìn)行殺滅，分化和老化是沒(méi)有辦法補(bǔ)救的。