1. 血清沉淀是什么？   

血清中經常會出現肉眼可見的沉淀，其成分有多種類型，產生的原因有很多。主要有纖維蛋白（絮狀沉淀）、甲胎蛋白、脂蛋白、冷凝集素、玻粘連蛋白、磷酸鈣（顯微鏡下小黑點沉淀）、膽固醇等。

纖維蛋白（Fibrin）

血清中肉眼可見的沉淀物大多屬于這一類型。由于在生產過程中，血清采集、過濾（3 次 0.1μm過濾）和灌裝處理都是在低溫條件下快速完成, 此時血清中纖維蛋白原（Fibrinogen）處于溶解狀態。但在解凍之后, 血清中纖維蛋白原往往會發生凝集，形成肉眼可見的沉淀。

磷酸鈣（Calcium Phosphate）

這是一種常見的沉淀成分，通常會造成血清出現云霧狀渾濁。當血清在 37℃保存時，這種現象尤其明顯，在倒置顯微鏡下可觀察到小黑點的存在。這些小黑點在布朗運動的作用下四處游動，常被誤認為是微生物污染。

其他成分（Other）

血清中的其他成分也會形成沉淀，例如膽固醇形成的油脂滴和其他蛋白沉淀等。

2. 沉淀是如何形成的？            

造成沉淀的主要原因是溫度的改變、熱滅活、反復凍融、長期儲存于2-8℃或者室溫。

3. 血清沉淀會影響細胞培養嗎？

我們在出廠前都會對血清進行一系列質檢測試，確保血清質量達到嚴格標準。血清測試和細胞培養經驗也表明，其沉淀成分不會影響血清作為細胞培養添加物的表現。這一點得到了眾多用戶和其他血清供應商的肯定。解凍之后, 血清中纖維蛋白原往往會發生凝集，形成肉眼可見的沉淀。

磷酸鈣顆粒經常會被當成微生物污染而引發不必要的擔憂。一般情況下，當操作人員融化血清后注意到有霧狀渾濁時，常將其存放在 4℃冰箱中觀察，并考慮接下來是否繼續使用。但這樣會使沉淀進一步增多，反而會使血清更加渾濁，進而誤以為存在血清污染。并且，在倒置顯微鏡下，可在血清中觀察到小黑點（磷酸鈣顆粒的布朗運動），更容易使人誤以為存在微生物污染。

為防止這類誤解的產生，我們不建議用戶培養血清來驗證是否存在污染，而是將血清直接接種在細菌培養基上進行培養，以觀察是否有細菌的增殖。并且，進行革蘭氏染色，并在油鏡（100 X 10 倍）下觀察可直接確認是否存在微生物污染。

WinSera血清采用先進的標準，經過3次0.1μm過濾，有效去除霉菌、細菌、酵母菌、支原體等，并通過ISO13485質量體系認證。

4. 如何避免血清沉淀                

正確解凍

首先，應按照逐步解凍的方式正確解凍血清：從-20℃取出后，置于4℃冰箱緩慢解凍，最后置于室溫完成解凍。如果直接從-20℃拿到室溫或37℃水浴解凍，則非常容易產生沉淀。在解凍過程中，請注意，應時不時緩慢搖晃血清瓶，可減少沉淀的產生。為避免反復凍融，建議您將血清分裝使用。

使用和保存注意事項

血清沉淀很難預測和避免，出現沉淀后也無需擔憂，這并不會影響血清的品質。已知血清沉淀在以下條件下會有增多的可能：

1) 熱滅活；

2) 37℃培養；

3) 反復凍融；

4) 伽馬射線照射；

5) 2-8℃長期保存；

6) 長期保存于可自動化霜的冰箱中（溫度不穩定）；

血清沉淀的形成機理多種多樣，具體的機理尚不十分明確。我們尚不能準確預測和控制血清沉淀的產生。目前市面上所有品牌的血清產品都存在沉淀現象，這一點可以在各品牌網站上關于沉淀問題的聲明上得到證實。

5. 有沉淀時如何處理？             

我們建議您采用2000rpm離心5分鐘，取上清使用就好，比過濾方便，不需要另外準備濾芯和針筒，且不容易污染。

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血清產品中出現沉淀屬于正常現象，不會影響到血清的品質，對細胞培養也不會產生影響，大家可以放心使用，若不立即使用，血清應保存在-20℃以下。

在進行細胞培養時，我們經常會聽到一些專業名詞，原代培養是什么？什么是世代數？細胞系是什么？有限細胞系又代表的是什么？有的專有名詞搞不清楚的話，會對細胞培養過程也會有一定的影響。根據老師們的反饋，我們總結了以下容易混淆的概念供大家參考~

1原代培養（Primary culture）

開始于直接取自生物體的細胞、組織或器官的培養稱為原代培養。通常代表異質細胞群，很難標準化和繁殖。它們的壽命一般有限，而且已知它們會隨著時間而改變其差異特征。

2傳代（Passage(Subculture)）

細胞從一個皿里轉移或傳代到另一皿里的過程稱為細胞傳代。這是一個操作行為，無法準確定義細胞分裂次數。

3傳代次數（Passage number）

一種細胞被傳代培養的次數稱為傳代次數。

4世代數（Generation number）

一種細胞所經歷的細胞數量倍增次數稱為世代數。

5群體倍增時間（Population doubling time）

在對數生長期中期細胞數量翻倍所需要的時間間隔稱為群體倍增時間。

6群體倍增次數（Population doubling）

在培養過程中細胞所經歷的細胞數量倍增次數稱為群體倍增次數。

7細胞系（Cell line）

原代細胞經過第一次傳代后增殖的細胞稱為細胞系或亞克隆。隨著細胞的傳代，生長能力*強的細胞會占據優勢，最終導致細胞群體在基因型和表現型上達到一定程度的均一性。

8細胞株（Cell strain）

細胞系通過選擇或克隆獲得的具有特征的細胞系稱為細胞株。與親代細胞系起始時相比，細胞株往往會獲得其他一些遺傳學改變。

9有限細胞系（Finite cell line）

通過傳代增殖但在體外只能增殖有限細胞數量的一種細胞稱為有限細胞系（通常60-70倍增次數）。

10衰老（Senescence）

與染色體端粒縮短相聯系的生物調控的增殖潛力損失稱為細胞衰老。存活的細胞也可能保留一些功能活性。

11永生化（Immortalization）

獲得無限的壽命，可能是細胞自發產生的，也可能是以轉染引起的。

12無限細胞系（Infinite/immortal/strain）

具有無限增殖能力的細胞系或細胞株稱為無限細胞系/連續細胞系。

13平板效率（Plating efficiency）

在傳代培養中產生集落的細胞的百分比稱為平板效率。如果每個集落都可以說是來自一個細胞，那么平板效率等同于克隆效率/集落形成效率。有時，平板效率被粗略地用來描述傳代培養后存活的細胞數量，但這被更好地稱為種子效率。

導致細胞污染的原因主要有以下幾方面：

環境：水浴鍋、培養箱水盤、細胞培養箱內壁、超凈臺、桌面及試劑瓶身、細胞房空氣消毒。

操作：細胞復蘇、傳代、凍存等過程中也可帶入污染。

試劑：血清、基礎培養基、胰酶、輔助試劑、營養添加物等。

耗材：培養皿或培養瓶、槍頭。

細胞本身：本身攜帶污染、細胞老化、分化等。

如何進行污染源排查？

*血清：其他試劑保持不變，僅更換血清。

*基礎培養基：其他試劑保持不變，僅更換基礎培養基。

*PBS：其他試劑保持不變，僅更換PBS。

*胰酶：若細胞復蘇的很好，一傳代就污染，可以嘗試其他試劑保持不變，更換消化用胰酶，看細胞狀態。

細胞反復復蘇都會出現污染，那可保持培養體系不變，培養其他類型且適用于此培養體系的細胞，觀察是否有污染出現。整個營養體系：基礎培養基、血清、營養添加物都可使用控制變量法進行排查。

*耗材

培養基及輔助試劑等條件不變，使用新耗材（培養皿或培養瓶、槍頭）培養細胞，觀察細胞是否有污染。

*細胞本身

細胞本身攜帶污染源。可對細胞進行無菌檢測（細菌、真菌、支原體）。

細胞分化，細胞一旦分化，很難逆轉，無法通過外界營養體系和生長條件的調整“*”。

*細胞老化：細胞一旦老化，是無法逆轉的。

因此，大家需要學會觀察細胞的形態并進行分析，可以按照這幾點進行控制變量排查，如若確認是細胞本身問題，若細胞本身不是很昂貴，建議丟掉重新培養，若較珍貴，污染后可嘗試根據污染種類選擇合適的抗生素進行殺滅，分化和老化是沒有辦法補救的。