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ScienCell胎牛血清
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ScienCell胎牛血清

產品名稱:特級胎牛血清

貨號:0500

規格:500ml

千舍生物開工大吉,干細胞專用,特級胎牛血清*......

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更新時間:2023-12-21

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ScienCell胎牛血清

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如何從T25瓶中轉移sf9細胞?能用蛋白酶消化嗎?

我們推薦使用脫落細胞的方法,此技術破壞性最小,生活力最高。通過使用巴斯德吸液管,讓細胞上培養基流動。作為一種選擇你也可以輕輕拍打培養瓶。只有在絕對必要的情況下,才使用胰消化細胞。

38.胰消化一個T25瓶的sf9細胞:

1. 去除培養基。

2. 2ml 1xPBS(足以覆蓋細胞表面)洗滌細胞,去除PBS

3. 加入2ml 1xEDTA(恰好覆蓋細胞表面)。

4. 37 ℃孵育510分鐘。在儀器下檢測看到5分鐘后它們正在向上移動。

5. 向細胞中加入2ml 細胞培養液,移入錐形管,用2ml培養液洗瓶壁,移入同一錐形管中。(培養基中的FBS終止了胰的活性。)

6. 離心(1100rpm)沉淀細胞。去除培養基。

7. 用新的培養基重新懸浮細胞。傳代。

39.Sf9, Sf21, high Five細胞懸浮培養時,肝素的使用量是多少?

為了防止懸浮培養細胞聚集的形成,使用肝素濃度為10單位/毫升細胞懸液。

40.在重新凍存sf9細胞前,它可以傳多少代?隨著傳代的次數的增加,它的感染能力會降低嗎?

通常情況當細胞經過30次傳代后,應該返回凍存。無論什么時候計數時,都應該檢查細胞活力。如果超過95%的細胞保持有活力和在大約30小時左右加倍,細胞仍然可以使用。如果活力和加倍時間下降,它們的感染力將不在是有效的。

41.貯存在冰箱中的瓶口已開的培養基,在放置幾天后顏色變紫?

這主要是由于在暴露到周圍的CO2水平時,碳酸氫納導致了pH值的上升。您可以在使用前松開瓶口,在CO2培養箱孵育培養基10-15分鐘,來校正溶液的pH值(確定松開瓶口以保證氣體交換)。

42. 細胞培養基偶然被凍,可否繼續使用?

如果細胞培養基偶然被凍,您應該熔化培養基并觀察是否有沉淀產生。如果沒有沉淀產生,培養基可以正常使用,如果出現沉淀,只能丟棄這些培養基。

43. 無血清培養與有血清培養使用的抗生素量一樣嗎?

當在無血清培養基中添加抗生素時,降低至少在有血清培養基中所使用濃度的50%。血清蛋白會結合和滅活一些抗生素。在無血清培養條件下,抗生素不被滅活,可能對于細胞達到毒性水平。

44. 培養基中添加了血清和抗生素后,可長期保存嗎?

一旦您在新鮮培養基中添加了血清和抗生素時,您應該在兩到三周內使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。

45.培養基及其它添加物和試劑可反復凍融嗎?

大部分添加物和試劑最多可以凍融3次,如果次數更多都會在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀,將會影響它的性能。

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ScienCell胎牛血清保存血清最好方法是什么?

   我們建議血清應保存在-5℃-20℃。但是若存放于4℃時,請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶,建議您無菌分裝血清至恰當的無菌容器內,再放回冷凍。反復凍融會對血清的品質造成不良影響。

如何解凍血清才不會使產品質量受損?

   我們建議您將血清從冷凍箱取出后,先置于2-8℃冰箱使之溶解,然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是,溶解過程中必須規則地搖晃均勻。

血清解凍后發現有絮狀沉淀物出現,該如何處理?

   血清在解凍過程(包括沒有*解凍)或儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如凝集素、纖維蛋白原和玻連蛋白等)可能會聚集成團,形成絮狀沉淀或外觀混濁;在運輸過程中,由于時間較長,所以往往有少許解凍,因此也可能稍有沉淀,但這些都不影響血清性能。

   若您欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內,以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養基內一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞過濾膜。

何謂熱滅活?

   一般是以56℃30分鐘來處理已解凍的血清,因為此加熱步驟,可以使補體去活化,而補體所參與的反應有:溶細胞,平滑肌的收縮,肥大細胞和血小板組胺的釋放,增強吞噬作用,淋巴細胞、巨噬細胞的趨化和激活。

有必要作熱滅活嗎?

   實驗顯示,經過正確處理的熱滅活血清,對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,或*沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清質量,而造成細胞生長速率的降低。而經過熱滅活的血清,沉淀物的形成,會顯著增多,這些沉淀物在導致顯微鏡下觀察,像是小黑點",常常會讓研究者認為血清遭受污染,而把血清放進37℃環境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。

   因此我們建議您,若非必須,您可以不做熱滅活處理血清。這樣,不僅節省您寶貴時間,更確保血清的質量。只在做免疫學研究或培養干細胞,昆蟲細胞和平滑肌細胞時才推薦做熱滅活。我公司也有已經熱滅活的血清可供選擇。

如何減少沉淀物的產生?

   我們建議您在使用血清的時候,注意下列的操作:

   ● 解凍血清時,請按照所建議的逐步解凍法(-20℃4℃至室溫),若血清解凍時,改變的溫度太大(如-20℃37℃),實驗顯示非常容易產生沉淀物。

   ● 解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發生。

   ● 請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質量。

   ● 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,則毋須做此步驟。

若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。



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