產(chǎn)品名稱：人類星形膠質(zhì)瘤耐替莫唑胺細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記    

細(xì)胞代碼：U251MG/TMZ+LUC(3000)

培養(yǎng)條件：DMEM+10%FBS +1%P/S +TMZ

生長(zhǎng)狀態(tài)：貼壁生長(zhǎng)

03、細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)能否更換胎牛血清?

首先要確定更換胎牛血清的理由，如果細(xì)胞培養(yǎng)無(wú)異常的話，不建議隨意更換不同品牌和來(lái)源的胎牛血清。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源，所以血清的來(lái)源(血源地)和品質(zhì)對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生極大的影響。來(lái)自不同地域和等級(jí)的血清，在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯(cuò)誤常會(huì)造成細(xì)胞死亡。

如果是使用的胎牛血清出現(xiàn)了問(wèn)題，比如保存不當(dāng)或操作不當(dāng)導(dǎo)致血清成分析出、混濁、污染等情況，可以優(yōu)先更換同品牌、等級(jí)、批次的血清;如果是產(chǎn)品質(zhì)量問(wèn)題更換血清品牌的話，需要用一批細(xì)胞進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)才行，以保證細(xì)胞能夠正常培養(yǎng)。

另外在購(gòu)買(mǎi)胎牛血清的時(shí)候要選擇正規(guī)來(lái)源和經(jīng)過(guò)海關(guān)檢疫胎牛血清，非正規(guī)來(lái)源的胎牛血清有很多安全隱患，對(duì)實(shí)驗(yàn)室、操作人員、細(xì)胞培養(yǎng)、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)都有很大的影響。

04、一般在拿到細(xì)胞后，應(yīng)該注意什么?

收到細(xì)胞后先不要開(kāi)蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議對(duì)收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各一張)，排除細(xì)胞本身污染的情況;收到細(xì)胞未開(kāi)封，出現(xiàn)污染狀況一般可以再申請(qǐng)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。

收到細(xì)胞時(shí)如無(wú)異常情況，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度，如為貼壁細(xì)胞，未超過(guò)80%匯合度時(shí)，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過(guò)80%匯合度時(shí)，請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。

細(xì)胞消化液建議使用PBS配制，慎用Hanks液配制。

05、培養(yǎng)細(xì)胞什么時(shí)候需要換液?

視細(xì)胞生長(zhǎng)密度而定，或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時(shí)間，按時(shí)更換培養(yǎng)基即可。

06、培養(yǎng)基到底要不要加抗生素?

除于特殊篩選系統(tǒng)中外，一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下，培養(yǎng)基中不應(yīng)添加任何抗生素。如果是沒(méi)有進(jìn)行過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)的新手，對(duì)無(wú)菌技術(shù)沒(méi)有信心的，或者提取的原代細(xì)胞，怕污染的，可以適量添加抗生素。抗生素本身也是有毒性的，有些抗生素的藥效濃度水平與毒效濃度水平非常接近，對(duì)細(xì)胞多少有傷害。

07、培養(yǎng)箱二氧化碳使用比例如何判定?

一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統(tǒng)，而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用的CO2濃度。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7g時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用10%CO2;當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5g時(shí)，則應(yīng)使用5CO2培養(yǎng)細(xì)胞。

小鼠肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞 AML-12

小鼠氣道平滑肌細(xì)胞 ASMC

小鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞 G422

小鼠精原細(xì)胞系 GC-1 spg

小鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞 MAEC

小鼠骨樣細(xì)胞 MLO-Y4

小鼠肺上皮細(xì)胞 MLE-12

小鼠腎臟內(nèi)髓集合管3上皮細(xì)胞 IMCD3

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 3T3-L1

小鼠乳腺癌細(xì)胞 4T1

小鼠乳腺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 4T1+luc

小鼠巨噬細(xì)胞 Ana-1

小鼠黑色素瘤細(xì)胞 B16

小鼠黑色素瘤細(xì)胞 B16-F10

小鼠黑色素瘤細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 B16-F10+LUC

小鼠原B細(xì)胞株 BAF3

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 BALB/3T3 clone A31

小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞株 bEnd.3

小鼠胰島素瘤胰島Beta細(xì)胞 Beta-TC-6

小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞 BV2

小鼠神經(jīng)干細(xì)胞 C17.2

小鼠成肌細(xì)胞 C2C12

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 C3H/10T1/2 Clone8  

小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞 CT26

小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 CT26+LUC

小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞 CT26.WT

小鼠胚胎干細(xì)胞 E14

小鼠淋巴瘤細(xì)胞 EL-4

小鼠乳腺癌細(xì)胞 EMT6

小鼠膠質(zhì)細(xì)胞瘤 GL-261

小鼠膠質(zhì)細(xì)胞瘤熒光素酶標(biāo)記 GL-261+luc

小鼠乳腺上皮細(xì)胞 HC11

小鼠肝癌細(xì)胞 HEPA1-6

小鼠肝癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 HEPA1-6+LUC

小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞 HT22

小鼠卵巢上皮癌細(xì)胞 ID8

小鼠單核巨噬細(xì)胞 J774A.1

小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞 K7M2WT (K7M2-wt)

小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 K7M2WT(K7M2-WT)-LUC

小鼠肺癌細(xì)胞 LLC

小鼠肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 LLC+LUC

小鼠淋巴瘤細(xì)胞 L5178Y TK+/- clone (3.7.2C)

小鼠成纖維細(xì)胞 L929

小鼠胰腺癌細(xì)胞 LTPA

小鼠乳腺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞 MA-891

小鼠膀胱癌細(xì)胞 MB49

小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞 MC38

小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 MC38+LUC

小鼠胚胎成骨細(xì)胞 MC3T3-E1

小鼠顱頂前骨細(xì)胞亞克隆14 MC3T3-E1subclone 14

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 MEF

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 MEF(霉素C處理)

小鼠前胃癌細(xì)胞 MFC

小鼠正常肝細(xì)胞 NCTC1469（NCTC CLONE 1469）

小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞 neuro-2a

小鼠胚胎細(xì)胞 NIH/3T3

小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞 OP9

小鼠雜交瘤（抗CD2）細(xì)胞 OKT11

小鼠畸胎瘤細(xì)胞 P19

小鼠白血病細(xì)胞 P388

小鼠肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞 P815

小鼠源基于MLV-10A1逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細(xì)胞系 PT-67

小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞 RAW 264.7

小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞 RGC-5

小鼠前列腺癌細(xì)胞 RM-1

小鼠雜交瘤 SDOW-17

小鼠骨髓瘤細(xì)胞 Sp2/0

小鼠骨髓瘤細(xì)胞 Sp2/0-Ag14

小鼠小腸內(nèi)分泌細(xì)胞 STC-1

小鼠腎小球系膜細(xì)胞 SV40-MES-13

小鼠淋巴結(jié)內(nèi)皮細(xì)胞 SVEC4-10

小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞 TM3

08、L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)中重要嗎?

L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)是重要的。脫掉氨基后，L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來(lái)源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后會(huì)降解，但是確切的降解率一直沒(méi)有最終定論。L-谷氨酰胺的降解導(dǎo)致氨的形成，而氨對(duì)于一些細(xì)胞具有毒性。

09、培養(yǎng)基里的粉紅色是什么?

酚紅一般作為培養(yǎng)基中pH值的指標(biāo)：當(dāng)培養(yǎng)基呈中性時(shí)為紅色，呈酸性時(shí)為黃色，堿性時(shí)為紫色。另外，酚紅可以模擬類固醇激素(特別是雌激素)的作用。如果要避免類固醇反應(yīng)，可以在無(wú)酚紅的培養(yǎng)基里進(jìn)行培養(yǎng)。

10、胰酶里EDTA的作用?

二價(jià)的離子會(huì)抑制胰酶活性，所以加入EDTA可以螯合掉Ca、Mg這樣的二價(jià)離子。胰酶也要注意不要反復(fù)凍融。

11、如何避免細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的污染?

主要還是考慮無(wú)菌環(huán)境，盡量做好操作臺(tái)的滅菌，別把培養(yǎng)基滴落在生物安全柜的入風(fēng)口，別在培養(yǎng)箱里把培養(yǎng)基打翻。這兩個(gè)地方霉菌一旦滋生，那你就只能等著用甲醛熏蒸了。

紫外無(wú)法殺滅霉菌，酒精也不行，只能用甲醛熏蒸，但是一定要注意安全。復(fù)蘇的時(shí)候，水浴鍋也需要進(jìn)行滅菌處理。一旦出現(xiàn)污染，不要急，能救的就用抗生素救一下，但是一般情況下，選擇扔掉。避免交叉感染，要不只能整個(gè)實(shí)驗(yàn)室消毒了。

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