人原代星形膠質細胞 

 產品編號：

產品規格：>5×10⁵細胞數

產品價格：9650

包裝規格：1ml凍存細胞懸液或T-25培養瓶

細胞詳述：

神經膠質細胞廣泛分布于中樞神經系統內，是除了神經元以外的所有細胞，在中樞神經系統中數量大約是神經元的十倍。具有支持、滋養神經元的作用。

膠質細胞與神經元一樣也具有細胞凸起，但其胞質凸起不分樹突和軸突。

星形膠質細胞，是膠質細胞中體積大的一種。從胞體發出許多長而分支的突起，伸展充填在神經細胞的胞體及其突起之間，起支持和分隔神經細胞的作用。

細胞特性:

1)  組織來源于人的正常腦組織。

2)  細胞鑒定：神經膠質纖維酸性蛋白(GFAP)免疫熒光染色法。

3)  經鑒定細胞純度高于90%。

4)  不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

5)  細胞生長方式：梭形細胞，貼壁培養。

推薦培養基：

我們推薦使用原代星形膠質細胞培養體系作為體外培養原代星形膠質細胞的培養基。

人原代星形膠質細胞常見問題：

1. 液體培養基的保存是冷藏好？還是冷凍好？

要冷藏！因為液體培養基經冷凍后再經溶化時，其溶液的PH值會發生改變，溶液往往變堿，某些成分溶解也會受到影響對細胞生長不利。故液體培養基一定要存放在冷藏箱中，通常液體培養基在冷藏條件下可存放6個月~一年。

2. 體培養基中谷氨酰胺的作用，及使用方法。

幾乎所有的細胞對谷氨酰胺有較高的要求，細胞需要谷氨酰胺合成蛋白質，在缺少谷氨酰胺時，細胞生長不良而死亡。所以，各種培養液中都含有較大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不穩定，應置-20?C冰凍保存，用前加入培養基中。加有谷氨酰胺的液體培養基4?C冰箱儲存兩周以上時，應重新加入原來量的谷氨酰胺。

3. 培養用液pH對細胞生長的影響

由于，大多數細胞適宜pH為7.2~7.4，偏離此范圍對細胞將產生有害的影響。各種細胞對pH的要求也不*相同，原代培養細胞一般對pH變動耐受差，無限細胞系耐受力強。

但總體來說，細胞耐酸性比耐堿性強一些，偏酸環境中更利于細胞生長。因此，我們在配制培養用液時，可把液體的pH稍微調得偏酸一些。液體在經過0.10um或0.22um濾膜過濾時，溶液的PH還會向上浮動0.2左右。

4. 常用培養基及培養用液的滲透壓范圍

培養基名稱滲透壓范圍（mOSM）

DMEM（高糖）315~350

DMEM（低糖）270~330

RPMI-1640260~290

MEM-EBSS280~310

MEM-NEAA280~310

McCoy5a280~310

MEM-a280~310

M—199275~305

IMDM270~300

DMEM/F-12280~310

F—10270~300

F—12275~300

培養基名稱滲透壓范圍（mOSM）

L—15280~320

D-Hanks280~300

Hanks280~300

PBS275~300

5. 細胞傳代消化時所用胰酶濃度越高越好嗎？

不見得！因為胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、溫度、胰酶濃度及溶液中是否含有Ca++,Mg++離子和血清等因素有關。通常情況下，pH8.0,溫度37oC其作用能力z強。另外，鈣、鎂離子及血清均能大大降低其消化能力。我們每次進行傳代消化前，一定要用D-Hanks液或PBS液反復沖洗細胞培養瓶，以便于將含血清的培養基沖洗干凈，這樣就能大大提高消化液的消化能力。通常使用的消化液濃度為：

（1）０.０５％胰蛋白酶＋０.０２％ＥＤＴＡ；

（2）０.２５％胰蛋白酶＋０.０３％ＥＤＴＡ。

（3）0.25%胰蛋白酶

溶液ｐＨ８.０～９.０；使用Ｄ－Ｈａｎｋ液配制。多數細胞傳代消化可使用０.０５％胰蛋白酶＋０.０２％ＥＤＴＡ這種消化液。

6. 培養基在使用過程中應注意的問題：

（1）培養基在使用前需37oC預熱或在室溫平衡后再使用。

（2）細胞培養過程中，吸取過培養液的吸管不能再用火焰燒灼，防止殘留在吸管內的培養基焦化，將有害物質帶入培養液中。

（3）盡量縮短各種液體、細胞的暴露時間。

（4）避免液體間、細胞間的交叉污染。

（5）配制*培養基時，配制的量在2周內用完為好。

7. 血清的有關問題：

新生牛血清：新出生牛5天內取血制成

小牛血清：小牛出生16周以內采血制成。

胎牛血清：（進口血清）要求剖腹取胎制成。

國內廠家往往不能做到，經常把出生2天以內采血稱為胎牛血清。

根據血清的生產工藝及血紅蛋白、內毒素含量又分為：

（1）.特級胎牛血清：40納米過濾，內毒素含量≤10EU，血紅蛋白含量≤10mg/dl。

（2）.優等胎牛血清：經過3次100納米過濾，內毒素含量≤25EU/ml，血紅蛋白含量≤25mg/ml。

（3）.標準胎牛血清：3次100納米過濾，低內毒素，低血紅蛋白含量。

（4）.活性碳/葡聚糖處理血清：激素含量大大降低。

（5）.透析型胎牛血清：次黃嘌呤和胸腺核苷含量大大降低。

8. 其他細胞培養用液：除培養基、血清、谷氨酰胺外，其他幾種液體也屬必須，不可省略。

（1）雙抗：200倍，（1ml/支）其終濃度為青霉素100U/ml；鏈霉素100ug/ml，-24oC保存。

（2）L-谷氨酰胺：100倍，（1ml/支），終濃度2mM，-24oC保存。

（3）丙酮酸鈉：配制濃度50mM，4ml/支，終濃度為1mM/ml，-24oC保存。

（4）Hepes液：配制濃度1M（5ml/支），一支Hepes加入到200ml

*培養基中，終濃度為25mM/ml，常溫保存。

9. 支原體污染及檢測：

（1）支原體污染在細胞培養中z常見、不易被查覺，但支原體污染可顯著影響細胞功能干擾實驗結果。支原體是介于細菌和病毒之間的目前所知能獨立生活的z小微生物，它無細胞壁，形態呈高度多形性，z小直徑0.2um，可通過濾器。

目前通過對國內100余株/系細胞的檢測，形勢不容樂觀。污染率達30%~60%。課題組從國外引進細胞株/系也經常出現支原體的污染。支原體在污染細胞后，它通過影響細胞的DNA、RNA的合成及急速消耗培養基中的氨基酸來抑制細胞的生長，并能降低細胞的融合率。因此，在運用各種細胞系進行實驗研究時，首先要證明所用細胞有無支原體的污染。

（2）支原體污染后，培養基可不發生渾濁，細胞病變輕微或不明顯，因此難以發現。目前，支原體檢測的方法有以下幾種。

（a）相差顯微鏡觀察；

（b）低張處理地衣紅染色法；

（c）熒光染色法；

（d）酶標法；

（e）PCR法：使用該方法進行檢測。

優點：靈敏度高，檢測耗時短，樣品量小

（只需50ul細胞培養用液上清）。

缺點：引物及制劑費用較高。