1、不同的細(xì)胞，對(duì)培養(yǎng)環(huán)境的要求不一樣

這個(gè)不僅僅是說(shuō)培養(yǎng)基的不同，還有就是細(xì)胞生長(zhǎng)的空間密度問(wèn)題。有一些細(xì)胞是數(shù)量多一點(diǎn)比較好生長(zhǎng)，生長(zhǎng)狀態(tài)也比較好。這種一般是屬于生長(zhǎng)速度慢的細(xì)胞。譬如內(nèi)皮細(xì)胞。而有一些是細(xì)胞是數(shù)量少一點(diǎn)細(xì)胞狀態(tài)會(huì)生長(zhǎng)的比較好，譬如巨噬細(xì)胞和某些腫瘤細(xì)胞。

尤其是巨噬細(xì)胞，生長(zhǎng)速度非常得快，貼壁速度很快，所以傳代時(shí)就應(yīng)該留很少量的細(xì)胞，這樣細(xì)胞狀態(tài)會(huì)比較好。并且巨噬細(xì)胞比較喜歡扎堆生長(zhǎng)，而堆與堆之間是有空間的。如果長(zhǎng)成相連在一起的一滿片的時(shí)候，細(xì)胞形態(tài)基本上就會(huì)差了，老化的會(huì)比較多，對(duì)后期實(shí)驗(yàn)結(jié)果是不好的。

所以在養(yǎng)細(xì)胞的時(shí)候應(yīng)該摸索該細(xì)胞喜歡的生長(zhǎng)空間密度。

2、發(fā)現(xiàn)養(yǎng)的細(xì)胞形態(tài)怎么都不好

對(duì)于貼壁細(xì)胞，如果細(xì)胞形態(tài)不好，或者細(xì)胞形態(tài)不清晰，表面似有異物等，可以在傳代的時(shí)候進(jìn)行如下操作：

首先，倒掉舊的培養(yǎng)基，加入 3 mL 新的培養(yǎng)基（有無(wú)血清的都可）洗滌一次，用滴管吸走。然后再加入 3 mL 的培養(yǎng)基，進(jìn)行預(yù)吹打，控制吹打力度，輕輕地大概沿著瓶底過(guò)一遍，然后吸走。這時(shí)侯再開(kāi)始正式的消化、吹打。

注：巨噬細(xì)胞我們只吹打，不消化的。

其次，把吹打下來(lái)的細(xì)胞懸液加入到新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，培養(yǎng)瓶事先加入培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，按時(shí)間點(diǎn)觀察細(xì)胞貼壁情況。10 分鐘觀察一次，20 分鐘，30 分鐘觀察一次。選擇一個(gè)時(shí)間點(diǎn)，已經(jīng)有部分細(xì)胞貼壁的情況下，重新置于潔凈臺(tái)，底面朝上迅速倒出其中的培養(yǎng)基，加入 3 mL 新培養(yǎng)基再輕輕洗一次。然后加入*培養(yǎng)基培養(yǎng)。后續(xù)觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況以及形態(tài)。這就是二傳。

如果一次效果還不理想，可重復(fù)多次。直到找到細(xì)胞形態(tài)。其中要注意結(jié)合細(xì)胞喜歡的生長(zhǎng)情況。喜歡多一點(diǎn)數(shù)量長(zhǎng)得好的細(xì)胞你就等貼壁細(xì)胞比較多點(diǎn)的時(shí)候再傳。反之亦然。這個(gè)方法真的很好用。

3、培養(yǎng)基的量

這個(gè)是要靠自己去摸索你所養(yǎng)的細(xì)胞的。并不是小的玻璃方瓶 12 mL，大方瓶14mL 的。有些細(xì)胞反而是培養(yǎng)基少一點(diǎn)相反細(xì)胞形態(tài)會(huì)長(zhǎng)得比較好。對(duì)于生長(zhǎng)速度快的細(xì)胞，易生長(zhǎng)的細(xì)胞加少一點(diǎn)培養(yǎng)基細(xì)胞形態(tài)會(huì)更好。但是要注意換液掌握。

培養(yǎng)基又該如何選擇呢？

經(jīng)典/基礎(chǔ)培養(yǎng)基屬于合成培養(yǎng)基，是根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分，用化學(xué)物質(zhì)模擬合成、人工設(shè)計(jì)、配制的培養(yǎng)基，其主要成分有氨基酸、碳水化合物、無(wú)機(jī)鹽、維生素及其他輔助成分，比如 DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12，這些都是應(yīng)用非常廣泛的經(jīng)典/基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)基。

人胚腎細(xì)胞 HEK-293（293） MEM+10%FBS+1%P/S 貼壁+懸浮生長(zhǎng)

人胚腎細(xì)胞 HEK-293A DMEM+10%FBS+1%P/S 貼壁+懸浮生長(zhǎng)

人高轉(zhuǎn)移鼻咽癌細(xì)胞系 5-8F  1640+10%FBS+1%P/S    貼壁生長(zhǎng)

人鼻咽癌細(xì)胞 C666-1 1640+10%FBS +1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人鼻咽癌細(xì)胞 NPC/HK-1 1640+10%FBS +1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

豬鼻甲黏膜成纖維細(xì)胞 PT-K75 DMEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人卵巢癌細(xì)胞 A2780 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺 +1%P/S   

人卵巢癌細(xì)胞+GFP A2780+GFP 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺 +1%P/S  

人卵巢腺癌細(xì)胞 CAOV-3 DMEM(含NaHCO3 1.5g / L)+10%FBS+1%P/S

人卵巢癌細(xì)胞 CoC1  1640+10%FBS+1%P/S  

人卵巢透明細(xì)胞癌細(xì)胞 ES-2 McCOY's 5A +10%FBS+1%P/S

人卵巢癌細(xì)胞 HEY DMEM+10%FBS+1%P/S  

人卵巢癌細(xì)胞 HEY A8 DMEM+10%FBS+1%P/S

人高轉(zhuǎn)移卵巢癌細(xì)胞 HO-8910PM 1640+10%FBS+1%P/S

人正常卵巢上皮細(xì)胞系 IOSE-80（IOSE80;NFHIOSE-80;IOSE80UBC;IOSE-Van; IOSE-VAN） 1640+10%FBS+1%P/S

人卵巢顆粒細(xì)胞瘤細(xì)胞 KGN D/F12+10%FBS+1%P/S

人卵巢腺癌細(xì)胞 OVCAR-3 1640(含NaHCO3 1.5g/L)+20%FBS+1%P/S + 0.01mg/ml牛胰島素

人卵巢癌細(xì)胞 SK-OV-3 Mccoy`s 5A +10%FBS+1%P/S

人卵巢癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 SK-OV-3+LUC Mccoy`s 5A +10%FBS+1%P/S

小鼠卵巢上皮癌細(xì)胞 ID8 DMEM+10%FBS+1%P/S  

倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞 CHO DMEM+10%FBS+1%P/S

倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞,二氫葉酸還原酶缺陷 CHO/dhFr- IMDM+10%FBS+P/S1%+0.05mM次嘌呤+0.016mM胸腺嘧啶+100nM氨甲喋呤。

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞k1 亞克隆系 CHO-K1 F12K+10%FBS+1%P/S

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞k1 亞克隆系 CHO-K1（懸浮） CHO GROW CD2培養(yǎng)基+1%L-谷氨酰胺+1%P/S

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞 CTLA4 IG-24 DMEM+10%FBS+0.2mM脯氨酸+0.001mM氨甲蝶呤+1%P/S

倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞 LEC-1 MEMα+10%FBS+1%P/S

人高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞 95-D  1640+10%FBS+1%P/S

 人肺癌細(xì)胞 A549  F12K+10%FBS+1%P/S   

 人肺癌細(xì)胞+RFP A549+RFP F12K+10%FBS+1%P/S

 人肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 A549+luc F12K+10%FBS+1%P/S

人肺癌細(xì)胞 Calu-1 MCCOY'S 5A+10%FBS+1%P/S  

人肺癌細(xì)胞 DMS 53 Waymouth's MB 752/1 medium (Invitrogen, 11220-035)+10%FBS+1%P/S

人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 HCC827 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺 +1%丙酮酸鈉+1%P/S

人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 HCC827+LUC 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺 +1%丙酮酸鈉+1%P/S

人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H1299 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%（10mM）HEPES +1%丙酮酸鈉+1%P/S

人肺癌細(xì)胞 NCI-H1437 1640+10%FBS+1%丙酮酸鈉+1%hepes+1%PS

人經(jīng)典小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-h1688 1640+20% FBS+1%P/S 細(xì)胞漲的慢2-3周發(fā)貨

人肺癌細(xì)胞 NCI-H1703 1640+10% FBS+1%P/S

人肺癌細(xì)胞 NCI-H1944 1640+10%FBS++1%PS

人肺癌細(xì)胞 NCI-H2126 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺 +1%丙酮酸鈉+1%P/S

人肺癌細(xì)胞 NCI-H2228 1640+10%FBS+1%P/S+1%L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉

人肺癌細(xì)胞 NCI-H23 1640+10%FBS+1%P/S+1%L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉

人肺癌細(xì)胞(淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移) NCI-H292 1640+10%FBS+1%P/S

人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H358 1640+10%FBS+1%P/S

人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H446 1640+10%FBS+1%PS

人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H460 [H460]  1640+10%FBS+1%P/S+1%L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉

人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H524  1640+10%FBS+1%P/S

人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H661[h661]  1640+10%FBS+1%P/S

人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H82 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉+1%P/S

人肺癌細(xì)胞 pc-9 1640+10%FBS+1%P/S

人小細(xì)胞肺癌 SBC-2  1640+10%FBS+1%P/S   

人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 SHP-77 1640+10FBS+1%L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉+1% PS

小鼠肺癌細(xì)胞 LLC DMEM+10%FBS+1%P/S

小鼠肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 LLC+LUC DMEM+10%FBS+1%P/S

人腦髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞 D283 Med  MEM+10%FBS+1%P/S

人腦髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞 D341 Med MEM+1%丙酮酸鈉+1%NEAA+10%FBS+1%P/S  

永生化人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞 HCMEC/D3 內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)體系（PriMed-iCell-002）

人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞 HS683 DMEM+15%FBS+1%P/S  

人腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞 KNS-89 DMEM +10%FBS+1%P/S

人腦膠質(zhì)瘤 SNB-19 DMEM+10%FBS+1%P/S

人腦膠質(zhì)瘤 TJ905 DMEM+10%FBS+1%P/S

人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 U118MG（U-118MG） DMEM+10%FBS+1%P/S

人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 U87MG MEM+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%NEAA+1%P/S

人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤+RFP U87MG+RFP MEM+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%NEAA+1%P/S

小鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞 G422 DMEM+10%FBS+1%P/S

小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞株 bEnd.3 DMEM(含NaHCO3 1.5g/L)+10%FBS+1%P/S  

小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞 neuro-2a MEM+10%FBS+1%P/S

小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 neuro-2a+luc MEM+10%FBS+1%P/S

大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞 C6 F12K +2.5%FBS+15%HS（馬血清）+1%P/S

大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞綠色熒光標(biāo)記 C6+LUC F12K +2.5%FBS+15%HS（馬血清）+1%P/S

大鼠腦星形膠質(zhì)細(xì)胞 CTX DMEM+10%FBS+1%P/S  

大鼠腦I型星形膠質(zhì)細(xì)胞 CTX-TNA2 DMEM+10%FBS+1%P/S

大鼠腦間質(zhì)細(xì)胞 DI TNC1 DMEM+10%FBS+1%P/S