一.個別人的培養(yǎng)體系出現(xiàn)問題

1.檢查你所培養(yǎng)的細(xì)胞是否存在污染。
(a) 如果培養(yǎng)細(xì)胞未添加抗生素(必須添加!),細(xì)胞污染則是不可避免的。
   1)用肉眼和顯微鏡進(jìn)行檢查
   2)如果細(xì)胞被污染則要棄掉。
(b)由于支原體污染不容易覺察到，因此必須定期檢測

(c)檢測可能污染的途徑和原因

2.檢查你用于培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基和血清(例如:是否批次不同或廠商不同)。如果你常規(guī)使用的是粉劑或10X儲存液，而現(xiàn)在購買的培養(yǎng)基更換為1X液體，而隨后證明問題就出自于此，處理方法請參見下則分享內(nèi)容。

3.如果問題與培養(yǎng)基無關(guān)，那么很可能還是細(xì)胞的問題。
(a)復(fù)蘇另一支凍存的細(xì)胞，并且與正在培養(yǎng)的細(xì)胞加以比較。兩種細(xì)胞的培養(yǎng)應(yīng)分開，以免在培養(yǎng)之初就產(chǎn)生污染。隨后按(b) ~ (d) 步的方法做排查:
(b)對傳代培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，并繪制生長曲線與以前培養(yǎng)該細(xì)胞的資料進(jìn)行比較，檢在是否有下列改變:
   1)傳代時是否接種密度過低。
   2)細(xì)胞傳代是否過于頻繁。
   3)傳代前細(xì)胞平臺期是否過長。
(c)是否更換了胰蛋白酶或其他分離劑的批號?檢查批號和供應(yīng)商。
(d)是否細(xì)胞分離過程中嚴(yán)重?fù)p傷了細(xì)胞?應(yīng)檢測:
   1)胰蛋白酶(其他消化試劑)消化時間是否過長。
   2)消化液的濃度和活性是否過高、過強(qiáng)。

   3)胰蛋白酶消化時、孵箱溫度是否過高。
   4)吹打消化細(xì)胞時是否過于用力。
   5)細(xì)胞是否對EDTA過于敏感(如果添加了EDTA)，
   6)胰蛋白酶稀釋是否有誤。
   7)是否使用了一批劣質(zhì)的胰蛋白酶消化液。

二.問題較為普遍，其他人也遇到同樣的困難
檢查共用的設(shè)備和試劑
溫室和孵箱溫度
1.溫度和溫度設(shè)定不準(zhǔn)。
 (a)自動調(diào)溫器損壞。
 (b)開關(guān)孵箱門過于頻繁。
 (c)孵箱門未關(guān)緊。
 (d)風(fēng)扇損壞造成散熱不均。
用便攜式溫度表重新標(biāo)定孵箱溫度。

2.孵箱濕度不能維持
 (a)水盤中未加水，
 (b)孵箱有滲漏。
 (c)開關(guān)孵箱門過于頻繁，
 (d)在Petri培養(yǎng)皿中放置一定量的PBSA,每日稱重，以檢查蒸發(fā)率。

3.孵箱的C02濃度不準(zhǔn)
 (a)開關(guān)孵箱門過于頻繁。
 (b)CO2控制器出現(xiàn)問題。

4.用預(yù)先標(biāo)定的培養(yǎng)基監(jiān)測箱體內(nèi)的PH。

5.用CO2探頭(carborite)檢測孵箱環(huán)境。

6.用標(biāo)準(zhǔn)混合氣重新標(biāo)定零值和CO2實(shí)際值。

三.實(shí)驗(yàn)室是否發(fā)生其他變化?

1.與細(xì)胞培養(yǎng)有關(guān)的人員是否改變?
 (1)培養(yǎng)細(xì)胞人員是否發(fā)生增減
 (2)準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)人員是否發(fā)生增減
 (3)實(shí)驗(yàn)人員的準(zhǔn)備過程是否規(guī)范
 (4)實(shí)驗(yàn)人員是否接受過系統(tǒng)訓(xùn)練
 (5)實(shí)驗(yàn)空間和布局是否過于擁擠

2.細(xì)胞培養(yǎng)所需材料是否改變?
 (1)供應(yīng)商

（2）批號

（3）類型

（4）存儲期限

3.細(xì)胞培養(yǎng)的操作過程是否有變化？

（1）孵育時間

（2）操作速度

（3）操作順序

（4）位置

（5）范圍大小

4.細(xì)胞培養(yǎng)的專業(yè)儀器設(shè)備是否完好？

（1）新近購置：是否新添儀器設(shè)備？

（2）運(yùn)行狀況：是否設(shè)備損壞？

（3）擺放位置：正在使用的儀器是否有足夠的擺放空間，是否要移動鄰近的儀器？

（4）操作溫度：儀器是否在正常的溫度范圍內(nèi)運(yùn)轉(zhuǎn)，你的樣品是否也需此溫度范圍？